Práctica 17: Detección de la reacción de peroxidasa en leucocitos

Detección de la reacción de peroxidasa en leucocitos

Objetivo

El objetivo de la práctica es realizar un frotis sanguíneo, teñirlo y hacer un examen microscópico

Fundamento y significado clínico

La reacción de peroxidasa, en particular la reacción citoquímicamente significativa de mieloperoxidasa, sirve de indicador para la presencia de elementos celulares mieloicos. El grado de madurez de los granulocitos en maduración puede ser estimado esencialmente según la intensidad de la reacción cromática pardo-negruzca.

Las peroxidasas son catalasas lisososomales que transfieren el hidrógeno desde un donador adecuado (anteriormente la bencidina cancerígena, aquí: 4-cloro-1-naftol) a un peróxido (aquí: perçoxido de hidrógeno). Entonces el donador 4-cloro-1-naftol se oxida y transforma en un colorante insoluble pardo negruzco, que puede utilizarse como indicador de la correspondiente actividad de peroxidasas.

Materiales

• Portaobjetos

• Lancetas

• Cubetas para la tinción

• Capilares no heparinizados

Muestra

• Sangre capilar no hemolizada

Reactivos

• R1: 4-cloro-1-naftol
• R2: Tris(hidroximetil) aminometano-HCl solución tampón
• R3: solución de peróxido de hidrógeno

• Solución de Mayer

Procedimiento

- Preparación de las muestras

1. Hacemos un frotis de sangre con ayuda de los portas y una lanceta
2. Secamos al aire durante 30 minutos
3. Fijamos con la mezcla fijadorea leucognost durante 3 minutos
4. Enjuagamos con agua corriente del grifo durante 10 segundos
5. Secamos al aire

- Preparación de los reactivos

1. Preparamos en un matraz la solución de tinción, en la que añadimos: 

- Contenido total del frasco de R1 y 15 mL de etanol y mezclamos muy bien

-Añadimos mientras seguimos revolviendo 45 mL de agua destilada

-Añadimos 10 gotas del R2

-Añadimos 2 gotas de R3

*La solución de tinción es utilizable durante 3 horas

- Técnica

1. Introducimos el frotis sanguíneo en la solución de tinción durante 10 minutos
2. Enjuagamos con agua destilada durante 10 segundos
3. Secamos al aire
4. Introducimos el porta en la contratinción con hemallumbre según Mayer durante 2 minutos
5. Enjuagamos con agua corriente del grifo durante 3-5 minutos
6. Secamos al aire
7. Observamos al microscopio

Lectura y resultado

Observación al microscopio: