Práctica 20: Determinación cuantitativa de hierro

Determinación cuantitativa de hierro

Objetivo

El objetivo de la práctica es determinar la concentración de hierro que hay en el sobrenadante de la práctica anterior

Fundamento

El hierro se disocia del complejo sérico hierro-transferrina en medio ácido débil. El hierro libre se reduce a  ión ferroso mediante el ácido ascórbico. Los iones ferrosos en presencia de FerroZine forma un complejo coloreado. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hierro en la muestra ensayada.

Significado clínico

el hierro es el constituyente de un gran número de enzimas. La mioglobina, proteína muscular, contiene hierro, así como el hígado. El hierro es necesario para la producción de Hb, molécula que transporta el oxígeno en el interior de los glóbulos rojos. Su déficit causa anemia ferropénica. Se encuentra niveles elevados de hierro en la hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda y en concentraciones altas de transferrina. La variación día a día es común en poblaciones sanas. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

Materiales

• Tubos de hemólisis de 3 mL

• Micropipetas automáticas

• Puntas de pipeta desechables

Muestra

• Sobrenadante de la práctica anterior (CFTH)

Reactivos

• R1- Tampón
• R2- Reductor
• R3- Color
• IRON CAL

Aparataje

• Espectofotómetro

Procedimiento

- Preparación de los reactivos

1. Disolvemos el contenido completo de R2 en un frasco de R1

2. Tapamos y mezclamos hasta disolver su contenido

- Técnica

1. Cogemos 4 tubos y los etiquetamos: Blanco reactivo, Patrón, Blanco muestra y muestra

2. Depositamos en cada tubo:

- Blanco reactivo: 1 mL de RT + 1 gota de R3 + 200 microlitros de agua destilada

- Patrón: 1 mL de RT + 1 gota de R3 + 200 microlitros de patrón

- Blanco muesta: 1 mL de RT + 200 microlitros de muestra

- Muestra: 1 mL de RT + 1 gota de R3 + 200 microlitros de muestra

3. Mezclamos e incubamos 10 minutos a Tª ambiente

4. Leemos en el espectofotómetro

Lectura y resultados

Absorbancia.

- Blanco reactivo: 0,000

- Patrón: 0,086

- Blanco muestra: 0,000

- Muestra: 0,094

Cálculos:

(A) Muesta - (A) Blanco muestra - (A) Blanco reactivo / (A) Patrón - (A) Blanco reactivo x 100 (concetración patrón)

0,094 / 0,086 x 100 = 115,12 microgramos/dL hierro