Práctica 11: Determinación de coombs indirecto

Determinación de Coombs indirecto

Objetivo

El objetivo de la práctica es investigar la presencia de Ac irregulares o incompletos en el suero del paciente enfrentándolos, primeramente, a hematíes específicos tipados y posteriormente, a la AGH para su detección

Materiales

• Tubo de hemólisis de 3 mL

• Tapones

• Pipetas pasteur

Muestra

• Sangre anticoagulada con EDTA

Reactivos 

• AGH

• Suero salino fisiológico

Aparataje

• Centrífuga

• Baño termostático

Procedimiento

1. Cogemos un tubo de hemólisis en el que procederemos a echar 0,5 mL de sangre y lo llenaremos de suero salino hasta arriba y lo centrifugamos a 2500 r.p.m durante 1 minuto
2. Repetimos el paso anterior 2 veces más
3. En otro tubo de hemólisis haremos el concentrado de hematíes con 0,1 mL de sangre que hemos lavado más 1,9 mL de suero salino y agitamos suavemente
4. En otro tubo limpio añadimos 4 gotas de suero problemas y 4 gotas del concentrado de hematíes
5. Incubamos la mezcla en el baño termostático durante 20 minutos a 37ºC
6. Lavamos esa mezcla con 1 mL de suero salino y centrifugamos a 2500 rpm durante 1 minuto y quitamos el sobrenadante
7. Añadimos al sedimento restante 4 gotas de AGH y centrifugamos a 2500 rpm durante 1 minuto
8. Resuspendemos dando golpecitos al tubo para que se desprenda y observamos si hay aglutinación
9. Finalmente el resultado es negativo, pero para comprobarlo haremos un control

- Control del resultado

1. En un tubo de hemólisis añadimos 4 gotas de AGH y 4 gotas de suero control
2. Incubamos a 37ºC durante 20 minutos y esperamos el resultado
3. Podemos comprobar que el resultado es negativo, por tanto el reactivo que hemos utilizado en las dos reacciones está en malas condiciones

Lectura y resultado
Hemos podido observar que la reacción de Coombs indirecto ha dado negativo y hemos hecho un control para asegurarnos de que era negativa, al hacerlo hemos visto que el control era también negativo y por ello hemos llegado a la conclusión de que los controles estaban en mal estado.

Práctica 10: Determinación de coombs directo en tubo

Determinación de coombs directo en tubo

Objetivo

El objetivo de la práctica es determinar si existen o no anticuerpos irregulares o incompletos fijados en la membrana de los hematíes del paciente enfrentando estos al reactivo de coombs específicos para ellos

También sirve para determinar si el paciente padece anemia hemolítica del recién nacido, anemia hemolítica tranfusional, anemia hemolítica inducidas por fármacos o anemia hemolítiva autoinmune.

Fundamento y significado clínico

Al añadir antiglobulina a los hematíes Rh+ (con Ag D), sensibilizados con el anti-D, hace de puente de unión entre los complejos Agd-Ac antiD y se visualiza la aglutinación.

Materiales

• Pipetas pasteur

• Tubos de hemólisis de 3 mL

• Tapones

Muestra

• Sangre anticoagulada

Reactivos

• AGH 

• Suero salino fisiológico (SF)

Aparataje

• Centrifuga

Procedimiento

1. Lavamos los hematíes de la muestra problema con suero salino
2. Cuando estén lavados, realizamos una dilución al 5% añadiendo 0,1 mL de la sangre lavada y 1,9 mL de suero salino fisiológico
3. Depositamos 4 gotas de AGH en un tubo pequeño
4. Añadimos 4 gotas de la suspensión de hematíes de la muestra problema en el tubo y agitamos suavemente
5. Centrifugamos a 2500 rpm durante 1 minuto
6. Resuspendemos el sedimento de hematíes dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo
7. Observamos la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizado

Lectura y resultados

Observamos que hay una ausencia de aglutinación, porque los hematíes aparecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

Práctica 9: Confirmación del grupo sanguíneo A, B y D, combinado con la determinación de anticuerpos irregulares (DiaClon Type + Screen)

Confirmación del grupo sanguíneo A, B y D, combinado con la determinación de Ac irregulares

Objetivo

El objetivo de la práctica es determinar el grupo sanguíneo de una muestra problema con una tarjeta ID-Card

Fundamento

La prueba se realiza utilizando la tarjeta ID-Card. Los resultados se podrán observar en las distintas columnas después de que la centrifuguemos. 
Iremos añadiendo la muestra problema y los diferentes reactivos y la incubaremos para ver los resultados.

Materiales

• Micropipetas automáticas

• Puntas de pipetas desechables

• Tubos de hemólisis de 3 mL

• Tapones

• Tarjeta ID-Card DiaClon Type + Screen

Muestra

• Sangre anticoagulada

• Suero

Reactivos

• Suero salino fisiológico

• ID-DiaCell I-II-III

Aparataje

• Centrifuga

• Baño termostático

Procedimiento
- Preparación de la suspensión de hematíes al 5%

1. Pipeteamos 0,5 mL de suero salino fisiológico en un tubo de hemólisis
2. Agregamos 50 microlitros de sangre total y mezclamos cuidadosamente 

- Prueba

1. Identificamos la tarjeta ID-Card con el número del grupo
2. Retiramos la lámina se sellado conforma vayamos utilizando los microtubos
3. Pipeteamos 10 microlitros de suspensión de hematíes del paciente en los primeros 3 microtubos de la tarjeta
4. Pipeteamos 50 microlitros de cada ID-DiaCell I-II-III en los microtubos 4, 5 y 6 correspondientemente
5. Agregamos 25 microlitros de suero en los microtubos 4, 5 y 6
6. Incubamos la tarjeta durante 15 minutos a 37ºC en el baño termostático
7. Centridugamos durante 10 minutos

Lectura y resultado

- Reacciones para los grupos ABO
-Microtubo 1: -
-Microtubo 2: +
-Microtubo 3: +

- Reacciones para RhD
-Microtubo 4: +
-Microtubo 5: +
-Microtubo 6: -