Práctica 5: Determinación celular de los grupos sanguíneos ABO y Rh en portaobjetos

Determinación celular de los grupos sanguíneos ABO y Rh en portaobjetos

Objetivo

Determinar el grupo sanguíneo ABO y el Rh de los hematíes y observar la presencia de aglutinación en el porta

Fundamento

Al nacer una persona posee en la membrana del hematíe los Ag que le corresponden dependiendo de la dotación genética. Cada grupo presenta en el hematíe, en otras células y en secreciones el Ag correspondiente a da denominación del grupo y en el plasma, el Ac contra el Ag que no posee el hematíe. Así el plasma del grupo A, tiene Ac naturales anti-B, y el plasma del grupo B, tiene Ac naturales anti-A. 

En el grupo AB, al tener el hematíe los dos Ag, el plasma no presenta anti-A ni anti-B.

En el grupo 0, al no tener el  hematíe Ag A y B, el plasma presenta anti-A y anti-B. El hematíe expresa toda la sustancia H sin utilizar.

Materiales

• Portaobjetos

• Puntas de pipeta desechables

• Lancetas

Muestra

• Sangre capilar

Reactivos

• Anti-A (A)
• Anti-B (B)
• Anti- AB (AB)
• Anti- D (D)
• Auntocontrol Rh

• Alcohol de 95ºC

Procedimiento 

1. Atemperamos los reactivos a Tª ambiente y preparamos el porta
2. Masajeamos el dedo de donde vamos a sacar la sangre, y lo desinfectamos con alcohol de 95ºC
3. Pinchamos con la lanceta 
4. Ponemos la gotas de sangre en el porta
5. Añadimos los reactivos
6. Mezclamos en cada pocillo con una punta de pipeta distinta, hasta ver aglutinación
7. Comprobamos el grupo ABO y el Rh

Resultado

Se pudo observar que la mezcla de sangre y reactivos no algutinaban en  ningún grupo sanguíneo, por tanto se deduce que es grupo 0.

En cambio el Rh si aglutino, así que es Rh +.

El control debe aglutinar siempre.

Práctica 4: Tinciones de Wright y May-Grünwald

Tinciones de Wright y May-Grünwald

Objetivo

El objetivo de esta práctica es preparar las distintas tinciones para las extensiones sanguíneas anteriormente preparadas, y ver sus diferencias

Fundamento

La tinción de May-Grünwald está formada por azul de metileno y sus derivados oxidades, componentes básicos y eosina, que es un colorante ácido. Los colorantes básicos se unen a los componentes ácidos de las células (ácidos nucleicos, gránulos en basófilos, y proteínas ácidas que se tiñen de color púrpura).

La eosina se une a la hemoglobina, a los componente básicos de las células y a los gránulos de los eosinófilos.

El contraste entre el azul de metileno, sus derivados y la eosina da un azul más o menos intenson  y una mayor o menor coloración.

La tinción de Wright es del mismo tipo que la de May-grünwald, ya que las dos son de tipo Romanowsky.

Materiales

• Cubetas para tinción y paralelas
• Pipeta graduada y auxiliar de pipeteo

• Vaso de precipitado
• Pipetas pasteur

Muestra

• Preparaciones de extensiones sanguíneas

Reactivos

• Agua destilada

• Suero salino fisiológico

• Colorante May-grünwalg

• Colorante de Wright

• Giemsa

Aparataje

• Microscopio

Procedimiento

- Tinción de May-Grünwald

1. Preparamos las cubetas con las paralelas y añadimos agua a la cubeta, para que a la hora de lavarlas sea más fácil quitarles el colorante
2. A continuación preparamos la dilución 1/10 de giemsa. Nuestro grupo preparó 18 mL de agua tamponada y 2 mL de colorante giemsa. 
3. Colocamos los portaobjetos que tienen las preparaciones sobre las parelelas y comenzamos la tinción
4. Cubrimos la preparación con 2 mL de colorante de May-Grünwald y la dejamos actuar durante 3 minutos
5. Después se vierte el colorante inclinando el porta y sin lavar se cubre con 2 mL de giemsa
6. A los 15 minutos, lavamos con agua en abundancia
7. Dejamos secar al aire

- Tinción de Wright

1. Colocamos el porta sobre las paralelas y comenzamos la tinción
2. La preparación se cubre con 1 mL de colorante de Wright, que se deja actuar durante 5 minutos
3. A continuación, y sin lavar, añadimos 1 mL de agua tamponada soplando ligeramente con la pipeta para conseguir una mezcla homogénea
4. Después de 5 minutos, vertimos el colorante y lavamos con abundante agua destilada
5. Dejamos secar al aire

Visualización

Para la visualización utilizaremos el microscopio y trabajaremos con todos los objetivos.

Práctica 3: Extensiones sanguíneas y tinción de panóptico rápido

Extensiones sanguíneas y tinción de panóptico rápido

Objetivo
El objetivo de esta técnica, es empezar a preparar extensiones sanguínea y aprender la técnica correcta

Fundamento
Una extensión o frotis sanguíneo consiste en recubrir un portaobjetos con una gota de sangre de tal manera que las células de esta se dispongan formando una sola capa de ellas. 
Es una técnica que nos permite obtener una información valiosa, tanto de la fórmula leucocitaria como del estudio de la morfología de las células.
El anticoagulante que usamos es el EDTA, ya que si usamos heparina favoceremos la agregación de plaquetas. Además favorece la aparición de un refuerzo de tonalidad azul de las tinciones cuando se emplea la coloración de panóptico.

Materiales

• Portaobjetos

• Lancetas

• Capilares heparinizados

• Contenedor de residuos

• Cubetas de Wertheim

Reactivos

• Alcohol de 70º

• Colorante de panóptico rápido

Muestra

• Sangre capilar heparinizada

Aparataje

• Microscopio

Procedimiento  
- Extensión

1. Preparamos todos los materiales necesarios
2. Con un algodón que esté mojado en alcohol de 70º, nos masajeamos el dedo en el que nos vamos a pinchar para sacar la sangre capilar 
3. Pinchamos con la lanceta y recogemos la sangre con el capilar heparinizado 
4. Cogemos el capilar y damos unos golpecitos sobre el porta, para que salga la sangre. 
5. Una vez que la gota esté en el porta, cogemos otro porta que nos ayudara a extenderla. Con este porta, hacemos contacto con la gota, manteniendo una inclinación de 45º y la sangre alcanzará por capilaridad todo el ancho de este porta.
6. Arrastramos con un movimiento uniforme y a a una velocidad media por todo el porta donde se deposito la sangre. El deslizamiento debe acabar a 1 cm del extremo final con un movimiento de ascensión del porta extensor.

En nuestro caso, nos surgieron varios problemas a la hora de hacer las extensiones: 

- Una gota de sangre demasiado pequeña

- Una gota de sangre demasiado grande 

- Extender mal la muestra

- Tinción

Para esta tinción, necesitaremos tres cubetas de wertheim y tres soluciones distintas. La primera es metanol (fijador), la segunda es santeño (ácido) y la tercera es tiacina (básico). 

1. Preparamos las cubetas llenándolas de colorante, cada uno con su correspondiente 
2. Colocamos las cubetas en un extremo de cada mesa y sobre papel de filtro
3. Cogemos la preparación con unas pinzas
4. Introducimos la preparación en la primera cubeta que tiene el primer colorante, el fijador, y la sacamos 5 veces seguidas. Después la golpeamos un poco para que caiga el exceso de colorante.
5. Introducimos le preparación en la segunda cubeta y la sacamos otras 5 veces, secamos y hacemos lo mismo con la tercera cubeta. 
6. Lavamos con abundante agua 
7. Dejamos secar 

Visualización